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• 화학적 발광법을 이용한 Western Blot

• HRP가 사용된 각종 Blot(Southern, Northern) 등에 가능

Low pico-gram ~ mid femto-gram

PVDF, Nitrocellulose membrane

24 ~ 26 hours

X-ray film, CCD Imager

필름상의 background가 나타납니다.

HRP가 너무 많습니다.

HRP-conjugate를 최소 10배 이상 희석하여 사용하십시오.

Membrane에 갈색 또는 노란색 밴드가 나타납니다.

시그날이 약하거나 없습니다.

너무 많은 HRP가 substrate를 고갈시켜 시그날이 빨리 사라지게 된 것입니다.

HRP-conjugate를 최소 10배 이상 희석하여 사용하십시오.

Antigen이나 antibody의 양이 불충분합니다.

Antigen이나 antibody의 양을 늘려주십시오.

Protein transfer 효율이 낮습니다.

Transfer 효율을 최적화 하십시오.

Background가 높습니다.

HRP가 많습니다.

HRP-conjugate를 최소 10배 이상 희석하여 사용하십시오.

Blocking 이 적합하지 않습니다.

Blocking 조건을 최적화 하십시오.

Blocking Solution이 적합하지 않습니다.

다른 종류의 Blocking 시약을 사용하십시오.

Washing이 제대로 되지 않았습니다.

Washing 시간이나 횟수, 

양을 늘려보십시오.

필름이 과도하게 노출되었습니다.

노출시간을 감소 시킵시오.

Antigen이나 antibody의 농도가 너무 높습니다.

Antigen이나 antibody의 

농도를 감소시켜 사용하십시오.

필름의 반점형태의 background가 나타납니다.

HRP-conjugate에 침전물이 

생겼습니다.

0.2㎛ 필터를 이용하여 conjugate를 필터 하십시오.

Non-specific band가 

나타납니다.

HRP가 많습니다.

HRP-conjugate를 최소 10배 이상 희석하여 사용하십시오.

SDS로 인해 protein band에 non-specific band 결합이 

일어났습니다.

면역측정법 과정에서 SDS를 사용하지 마십시오.